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北京ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

來源： 發(fā)布時間：2025-12-19

昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（IC-BEVS）是一種真核表達(dá)系統(tǒng)，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細(xì)胞為宿主實現(xiàn)外源蛋白的生產(chǎn)。該系統(tǒng)具備便于規(guī)?；a(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢，近年已逐步應(yīng)用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產(chǎn)品的生產(chǎn)，在生物制品重組蛋白表達(dá)領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。Sf9 細(xì)胞系源自草地夜蛾細(xì)胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當(dāng)前較為常用的昆蟲細(xì)胞系之一。SHENTEK® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可對采用 Sf9 細(xì)胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。
抗體覆蓋率水平因技術(shù)平臺而異，其高低排序通常為 IMBS-MS 、IMBS-2D 、2D-Western Blot。北京ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

北京ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備,宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測

湖州申科生物CHO-K1HCP殘留檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），采用固相酶聯(lián)免疫吸附法原理，可對CHO-K1細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品中宿主殘留蛋白進行定量檢測。檢測時，向預(yù)包被抗CHO-K1HCPs綿羊多抗的酶標(biāo)板中，加入校準(zhǔn)品或待測樣品、HRP標(biāo)記的抗CHO-K1HCPs綿羊多抗共同孵育。洗滌后加入TMB底物顯色，隨后用終止液終止酶促反應(yīng)；再用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度，該吸光度與校準(zhǔn)品或待測樣品中HCPs濃度呈正相關(guān)，依據(jù)校準(zhǔn)品擬合的劑量-反應(yīng)曲線，即可算出待測樣品中HCPs的濃度。該試劑盒對待測樣品無需特殊處理，通過合適稀釋比例的適用性驗證，即可直接使用。且試劑盒操作步驟少、檢測快速，同時具備專一性強、性能穩(wěn)定可靠的特點。
北京ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備湖州申科系列宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測產(chǎn)品，均完成校準(zhǔn)品表征與抗體覆蓋率兩項關(guān)鍵分析工作。

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美國藥典 USP 通則 <1132.1>《質(zhì)譜法測定生物藥中殘留宿主細(xì)胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要內(nèi)容是介紹 LC-MS 技術(shù)在宿主細(xì)胞殘留蛋白檢測中的應(yīng)用。該通則圍繞樣品制備、質(zhì)譜測試條件建立、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)譜方法驗證等維度，詳細(xì)說明質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用于 HCPs 檢測的優(yōu)勢及需注意的事項。作為先進的分析技術(shù)平臺，質(zhì)譜技術(shù)在 HCPs 分析中的應(yīng)用，無論是單獨使用，還是與 ELISA 及其他分析方法聯(lián)合使用，都能幫助生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 檢測方法，進而保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

樣品質(zhì)量是影響宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測結(jié)果的因素之一。HCP 檢測覆蓋生物制品生產(chǎn)全流程，包含收獲、純化、制備等多個環(huán)節(jié)，不同樣品基質(zhì)會導(dǎo)致 HCP 檢測結(jié)果存在明顯差異。以含佐劑的疫苗為例，佐劑會產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致成品中難以檢測 HCP，因此通常在吸附工藝前的原液階段開展檢測。此外，樣品的收集、處理及保存方式也對檢測結(jié)果有重要影響。處理方式不當(dāng)可能造成蛋白降解或變性，進而影響檢測結(jié)果。比如將歷史批樣品用作內(nèi)部質(zhì)控品時，需結(jié)合其穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，合理設(shè)定保存條件與保存期限，以此保障檢測方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測，是保障生物制品安全及有效性的關(guān)鍵所在。

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湖州申科生物專注于研發(fā)貼合實際生產(chǎn)工藝的商業(yè)化宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測試劑盒，依托不同工藝下 HCP 的差異化分析，針對性推出各細(xì)分工藝領(lǐng)域的 HCP 檢測試劑盒。實驗數(shù)據(jù)顯示：針對 CHO-S 與 CHO-K1 兩種宿主細(xì)胞，兩類細(xì)胞共享 2458 種相同 HCP（占比 79.7%），但各自存在 392 種和 236 種特異性 HCP，充分體現(xiàn)工藝差異帶來的殘留蛋白特異性。進一步對比 B3 表達(dá)菌與 K2 克隆菌，盡管二者共享 1489 種相同蛋白（分別占比 88% 和 85%），但仍各自檢出 208 種和 258 種獨有蛋白，差異率為 12%-15%。這些結(jié)果直接證實，不同工藝路線與克隆株選擇會影響 HCP 殘留譜的構(gòu)成。據(jù)此，湖州申科提出 “工藝定制化檢測” 策略：通過準(zhǔn)確識別共性與特異性 HCP，針對性研發(fā)細(xì)分試劑盒產(chǎn)品。
線性范圍、中間精密度、靈敏度等關(guān)鍵參數(shù)的評估，是 HCP 檢測方法驗證的必備環(huán)節(jié)。北京工藝特異型宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測免疫策略

對 宿主細(xì)胞蛋白（HCP）抗體的關(guān)鍵要求是識別工藝 HCP、規(guī)避優(yōu)勢聚集，且突出潛在高風(fēng)險 HCP 的識別能力。北京ELISA法宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

為更優(yōu)管控工藝、保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，各國監(jiān)管機構(gòu)均要求提供所用宿主細(xì)胞蛋白（HCP）殘留檢測ELISA試劑盒的抗體覆蓋率數(shù)據(jù)。通常需開展覆蓋率分析的場景主要有以下四類：①臨床II期后，若仍使用商品化試劑盒，需評估其抗體覆蓋率是否能持續(xù)滿足質(zhì)量監(jiān)控需求；②臨床III期及后續(xù)階段，若產(chǎn)品研究者開發(fā)了平臺化或工藝專屬型HCP監(jiān)測方法，此類試劑盒使用前需評估其覆蓋率水平與商業(yè)化試劑盒覆蓋率水平的差異；③申報階段若未提交覆蓋率數(shù)據(jù)，監(jiān)管機構(gòu)可能向企業(yè)提出補充提交的要求；④產(chǎn)品上市后，若發(fā)生生產(chǎn)場地變更、工藝變更、HCP分析方法變更等情況，研究者需評估變更前后抗體覆蓋率水平的差異，以及該差異對藥品質(zhì)量與安全性的影響。
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