微流控技術(shù)通過縱微尺度流體,能夠?qū)崿F(xiàn)多種試劑的精確混合、反應(yīng)和檢測的集成。將均相發(fā)光檢測整合到微流控芯片中,有望進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)“芯片實(shí)驗(yàn)室”(Lab-on-a-Chip)的愿景。例如,在芯片微通道內(nèi)完成細(xì)胞的裂解、目標(biāo)蛋白的免疫識別和均相發(fā)光反應(yīng),并通過集成的微型光學(xué)元件檢測信號。這種結(jié)合可以極大減少試劑用量(降至納升級)、縮短反應(yīng)時(shí)間、提高分析速度,并實(shí)現(xiàn)便攜化,為床邊診斷(POCT)和現(xiàn)場檢測提供新的解決方案。Duo'z均相化學(xué)發(fā)光在心血管疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值是什么?山東CRET技術(shù)均相發(fā)光解決方案

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是均相發(fā)光技術(shù)中應(yīng)用比較多方面的信號產(chǎn)生機(jī)制之一。其原理是:當(dāng)一個(gè)熒光基團(tuán)(供體,Donor)的發(fā)射光譜與另一個(gè)熒光基團(tuán)或淬滅基團(tuán)(受體,Acceptor)的吸收光譜有足夠重疊,且兩者距離非常接近(通常1-10納米)時(shí),供體的激發(fā)態(tài)能量會以非輻射方式轉(zhuǎn)移給受體。在均相檢測中,常將供體和受體分別標(biāo)記在相互作用的生物分子對(如一對抗體、或酶與底物肽)上。當(dāng)目標(biāo)分子存在并促使這對生物分子結(jié)合時(shí),供體與受體被拉近,發(fā)生有效的FRET,導(dǎo)致供體熒光淬滅,受體熒光增強(qiáng)(如果受體是熒光團(tuán))。通過監(jiān)測供體與受體熒光強(qiáng)度的比率變化,即可高靈敏度、高特異性地定量目標(biāo)分析物。北京化學(xué)發(fā)光均相發(fā)光解決方案POCT市場新機(jī)遇,浦光干式均相化學(xué)發(fā)光助您把握未來!

GPCR是比較大的藥物靶點(diǎn)家族,其功能研究涉及配體結(jié)合、第二信使產(chǎn)生、下游信號通路活化等多個(gè)層面。均相發(fā)光技術(shù)多方面滲透于此領(lǐng)域。對于配體結(jié)合競爭實(shí)驗(yàn),可采用TR-FRET,將受體標(biāo)記供體,配體標(biāo)記受體。對于GPCR活化后比較關(guān)鍵的cAMP積累或IP3/DAG產(chǎn)生,均有成熟的均相檢測試劑盒。例如,cAMP檢測常采用基于抗體競爭原理的均相發(fā)光免疫分析。細(xì)胞裂解后,內(nèi)源性cAMP與加入的標(biāo)記cAMP競爭結(jié)合有限量的抗cAMP抗體??贵w結(jié)合事件通過FRET或Alpha技術(shù)被檢測,信號強(qiáng)度與內(nèi)源性cAMP濃度成反比。這類方法直接在細(xì)胞裂解液中進(jìn)行,快速、靈敏,完美契合GPCR激動(dòng)劑/拮抗劑的高通量篩選。
熱遷移分析(CETSA)用于研究藥物在細(xì)胞或組織水平與靶蛋白的結(jié)合,傳統(tǒng)方法依賴Western Blot,通量低。與均相化學(xué)發(fā)光免疫檢測(特別是Alpha技術(shù))結(jié)合形成的CETSA HT,實(shí)現(xiàn)了高通量化。細(xì)胞經(jīng)藥物處理和不同溫度加熱后裂解,針對目標(biāo)蛋白的特異性抗體對(分別偶聯(lián)Alpha供體珠和受體珠)被加入裂解液。只有未因熱變性而沉淀的、保持天然構(gòu)象的蛋白才能被兩個(gè)抗體同時(shí)識別并拉近微珠產(chǎn)生信號。通過繪制藥物處理組與對照組的熱穩(wěn)定性曲線,可以直觀看到藥物結(jié)合引起的蛋白熱穩(wěn)定性偏移(Tm變化),從而確認(rèn)靶點(diǎn)結(jié)合并評估結(jié)合強(qiáng)度,廣泛應(yīng)用于早期藥物發(fā)現(xiàn)中的靶點(diǎn)確證。均相化學(xué)發(fā)光與熒光免疫技術(shù)相比,優(yōu)勢在哪?

從原理上深度對比均相與異相免疫分析,能清晰揭示均相技術(shù)的革新之處。異相分析法,以經(jīng)典的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)為表示,其檢測依賴于將捕獲抗體固定在固相載體(如微孔板)上,通過反復(fù)洗滌來分離“特異性結(jié)合”與“游離”的標(biāo)記物,比較終通過底物顯色或發(fā)光來定量。這個(gè)過程繁瑣、耗時(shí),且洗滌步驟容易導(dǎo)致結(jié)合物損失。而均相免疫分析則讓所有反應(yīng)組分在溶液存。通過物理化學(xué)手段,使得只有當(dāng)目標(biāo)分子正確結(jié)合,形成特定復(fù)合物時(shí),才能產(chǎn)生或改變發(fā)光信號。例如,在臨近誘導(dǎo)技術(shù)中,只有兩個(gè)標(biāo)記有供體和受體的抗體同時(shí)結(jié)合一個(gè)抗原分子并彼此靠近時(shí),能量轉(zhuǎn)移才能發(fā)生,從而報(bào)告陽性信號。所有未結(jié)合的標(biāo)記物因其距離遠(yuǎn),不產(chǎn)生有效信號,故無需分離。
32.無需冷鏈運(yùn)輸!浦光生物均相發(fā)光凍干試劑可常溫運(yùn)輸,降低運(yùn)輸成本,輕松觸達(dá)偏遠(yuǎn)地區(qū)!吉林POCT產(chǎn)品均相發(fā)光廠家有哪些
均相化學(xué)發(fā)光,國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢測平臺,領(lǐng)航醫(yī)療新時(shí)代!山東CRET技術(shù)均相發(fā)光解決方案
均相發(fā)光技術(shù)正逐步應(yīng)用于食品安全和環(huán)境監(jiān)測等多應(yīng)用領(lǐng)域。例如,檢測食品中的毒(如黃曲霉素)、抵抗細(xì)菌藥物殘留或病原菌等。通過設(shè)計(jì)針對這些污染物的抗體或適配體,并將其與均相化學(xué)發(fā)光信號系統(tǒng)偶聯(lián),就可以開發(fā)出快速、高通量的篩查方法。相較于傳統(tǒng)的色譜或微生物學(xué)方法,均相化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有檢測更快捷,適合大批量樣本的初篩的特點(diǎn)。在環(huán)境監(jiān)測中,常??捎糜跈z測水中的重金屬離子、有機(jī)污染物等,具有現(xiàn)場快速分析的潛力。山東CRET技術(shù)均相發(fā)光解決方案